سوال فوری ( طراحی پرایمر )

[f.saeedi]

به نام خدا
سلام . اگه اطلا عاتی درمورد طرا حی پرایمر ( مراحل کار ، نرم افزارهای مورد نیاز و نحوه کار با اونا ، تکنیکها ، سایتها و ...) دارید ممنون میشم بگید و منو از سر درگمی در بیارید . بازم ممنون و منتظرم ...

[zolfa]

به نام خدا
سلام . اگه اطلا عاتی درمورد طرا حی پرایمر ( مراحل کار ، نرم افزارهای مورد نیاز و نحوه کار با اونا ، تکنیکها ، سایتها و ...) دارید ممنون میشم بگید و منو از سر درگمی در بیارید . بازم ممنون و منتظرم ...

سلام
اين سايت طراحي پرايمر
NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)


اينم راهنماي طراحي و.....


راهنما (http://sid.ir/fa/vewssid/s_pdf/10713840474.pdf)

[Ar@m]

سلام کسی میتونه جواب سوال منو بده؟چطور میشه از مثبت کاذب درNested-PCR رهایی پیدا کرد؟من نیاز فوری دارم به جواب این سوال

[پیمان هادی فرکوش]

سلام کسی میتونه جواب سوال منو بده؟چطور میشه از مثبت کاذب درNested-PCR رهایی پیدا کرد؟من نیاز فوری دارم به جواب این سوال



يكي از منابع آلودگي اصلي در آزمايشگاه PCR مربوط به محصول PCR است كه از طريق تانك الكتروفورز و دستگاه UV به نقاط ديگر آزمايشگاه منتقل مي‏شود. پس از انجام الكتروفورز، بافر موجود در تانك الكتروفورز يك منبع بسيار قوي آلودگي است و چنانچه قطره كوچكي از آن در محيط آزمايشگاه يا اطراف تانك بريزد و خشك شود ذرات آئروسل حاصل از آن تا مدتها باعث آلودگي فضاي آزمايشگاه و مثبت شدن كاذب واكنشهاي PCR خواهد شد. اين مساله معمولاً هنگامي اتفاق مي‏افتد كه ژل آگاروز از تانك الكتروفورز به دستگاه UV منتقل مي‏شود. بنابراين، اين دو دستگاه بايد در حداقل فاصله از يكديگر و ترجيحاً در كنار يكديگر و در فضاي ويژه‏اي كه داراي لامپ UV و هواكش است، باشند و رفت و آمد در اين فضا با تعويض كفشها و روپوش صورت گيرد.

هر محصول واكنش چند ميكروليتري PCR مي تواند استخري با 15000 گالن آب را آلوده نمايد. اين مقدار در روش Nested PCR به 30000 گالن مي‏رسد. اين به اين معني است كه پنج ميكروليتر از اين حجم آب مي تواند در PCR جواب مثبت كاذب ايجاد نمايد.

بنابراين واضح است كه براي جلوگيري از بروز نتايج مثبت كاذب و آلوده شدن سيستم PCR بايد اقدامات قاطع و دقيقي انجام پذيرد. مواردي از اقدامات اوليه مورد نياز عبارتند از:

� در هنگام آزمايش نمونه‏ها از دستكشهاي يكبار مصرف استفاده شود و اين دستكشها پس از هر مرحله تعويض گردد
� نمونه‏هاي كلينيكي و نمونه‏هاي DNA استخراج شده در فريزر جدا از محل نگهداري كيتها و مواد مربوط به PCR نگهداري شود
� دماي آزمايشگاه بايد 20 الي 25 درجه سانتيگراد باشد و دماي فريزر و يخچال با نصب جدول ثبت دما كنترل گردد.

فضاي مورد نياز براي آزمايشگاه PCR شامل سه فضاي كاملاً مجزا است كه بايد توسط موانع فيزيكي از يكديگر جدا باشند و ورود و خروج به هر يك از اين فضاها با تعويض كفشها و روپوش انجام گيرد. اين فضاها و تجهيزات مورد نياز آنها عبارتند از:

تجهيزات مورد نياز

1) فضا جهت كار با نمونه‏هاي كلينيكي و استخراج DNA و RNA كه داراي لامپ UV و هود لامينار باشد، اين فضا بايستي كاملاً جدا از فضاي آماده سازي واكنشهاي PCR و الكتروفورز باشد. لامپ UV دو ساعت قبل از شروع كار و دو ساعت بعد از آن روشن شود. تجهيزات اوليه مورد نياز اين مكان عبارتند از:

� سمپلرهاي مخصوص اين فضا از حجم 5 تا 1000 ميكروليتر
� ميكروفيوژ 12000 دور در دقيقه
� Vortex
� تيوبها و رك مناسب

2) مكان مناسب جهت آماده سازي واكنشهاي PCR كه داراي لامپ UV و BOX بدون جريان هوا يا هود لامينار باشد. اين فضا بايد كاملاً جدا از فضاي آماده سازي نمونه‏هاي كلينيكي و الكتروفورز باشد. هيچ نوع DNA نبايد به اين فضا وارد شود. لامپ UV دو ساعت قبل از شروع كار و دو ساعت بعد از آن روشن شود. تجهيزات اوليه مورد نياز اين مكان عبارتند از:

� سمپلرهاي مخصوص اين فضا از حجم 1 تا 1000 ميكروليتر.
� ميكروفيوژ با دور 2000 دور در دقيقه.
ج Vortex
� تيوبها و رك مناسب
� فريزر �C20- و يخچال �C8-2

3) مكان مناسب براي استقرار UV transilluminator و دستگاه PCR و تانك الكتروفورز كه واجد لامپ UV و هواكش باشد. اين فضا بايد كاملاً جدا از دو فضاي قبلي باشد و ورود و خروج به آن بايد با تعويض كفشها و روپوش انجام گيرد. پس از استفاده از محصولات PCR، تيوبهاي مربوط به آنها در سطل مخصوص كه ارتباطي با فضاهاي ديگر آزمايشگاه نداشته باشد دور ريخته شود. لامپUVدو ساعت قبل از شروع كار و دو ساعت بعد از آن روشن شود. تجهيزات اوليه مورد نياز اين مكان عبارتند از:

� سمپلرهاي مخصوص اين فضا از حجم 5 تا 40 ميكروليتر
� ميكروفيوژ با سرعت 2000 دور در دقيقه
� تانك الكتروفورز و منبع تغذيه برق
د UV Transilluminator
� سيستم عكسبرداري
� دستگاه PCR

اين مكانها بايد از يكديگر مجزا باشند و بويژه در مكان سوم براي رفت و آمد بايد كفشها و روپوش تعويض گردد.

[molecular]

سلام دوستان
فرق pseudo primer با بقیه پرایمرا چیه؟؟؟؟؟
تو چه مواردی ازش استفاده میشه؟؟؟